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              三環抗抑郁劑固相萃取凈化方法
            1. 發布日期:2010-05-26      瀏覽次數:2241
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                三環抗抑郁劑固相萃取凈化方法
                1. 樣品制備
                A. 血漿或血清
                1mL的血漿或血清中加入4mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.0),充分混合,用1.0mol/L的KOH溶液調節pH值至6.0±0.5;
                B. 全血
                1mL血液中加入2mL甲醇,充分混合,離心去除蛋白沉淀;
                取上清液,加入10mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.0),充分混合,將用1.0mol/L的KOH溶液調節pH值至6.0±0.5;
                2. SPE凈化
                a. 活化:用2mL甲醇,2mL去離子水和1mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.0)分別沖洗柱床;
                注意:要保證吸附劑不干燥;
                b. 上樣:上樣流速控制在1~2mL/min;
                c. 淋洗:分別用3mL去離子水,1mL1.0mol/L的醋酸和3mL的甲醇分別淋洗,zui后將SPE柱抽5min至干燥;
                d. 洗脫:用2mL二氯甲烷/異丙醇/氨水(78:20:2)以1~2mL/min的速度進行洗脫。收集全部洗脫液;
                注意:洗脫液必須為當天新制備的新鮮溶液。
                3. 蒸發干燥
                將洗脫液在40℃以下旋轉蒸發至干 ;
                4. 檢測方法
                GC-NPD 或者GC-MS分析
                衍生化
                用50μL乙酸乙酯溶解蒸發后的樣品 ,加入50μL五氟丙酰酸酐(PFPA),充氮氣并密封,在70℃ 反應20min,冷卻至室溫,蒸發至干; 100μL乙酸乙酯定容 。
                非衍生化方法
                沒有衍生化的樣品也可以直接進行分析,用100μL甲醇重新定容;進1~ 3μL測定;
                LC檢測
                將第3步中的樣品,用200μL乙腈/去離子水(25:75)定容,用漩渦混合器混合30s,進100μL測定。
                5. 樣品成分
                三環抗抑郁劑
                本方法中使用的SPE柱
                Bond Elut Certify(130mg,3mL, PN.12102051)。
                 
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