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              尿液中的合成代謝類固醇類藥物固相萃取凈化方法
            1. 發布日期:2010-05-25      瀏覽次數:2336
              • 尿液中的合成代謝類固醇類藥物固相萃取凈化方法
                1.樣品預處理
                在尿液中加入內標物和2mLβ-葡萄糖醛酸酶( 5000F單位/mL)充分混合,在65℃條件下水解3h,處理前冷卻,用1.0mol/L的KOH溶液調節pH值至6.0±0.5;
                2. SPE凈化
                a. 活化:分別用3mL甲醇,3mL去離子水和1mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.0);在上樣前保持柱床濕潤;
                b. 上樣:以1~2 mL/min的流速將樣品載入SPE柱;
                c. 淋洗:用3mL10%(v/v)甲醇去離子水溶液淋洗,通空氣5min干燥柱床;再用1mL的正己烷或者正己烷/乙酸乙酯( 50/ 500,v/v)淋洗SPE柱;
                d. 洗脫:可以選擇如下四種方法,收集洗脫液;
                1) 3mL二氯甲烷/異丙醇/NH4OH( 78/ 80/ 2, v/v),溶劑流速控制1~ 2mL/min,收集洗脫液;洗脫液必須為當天制備的新鮮溶液;
                2)3mL二氯甲烷/異丙醇(80/20);
                3)3mL乙酸乙酯;
                4)3mL甲醇。
                3.蒸發干燥
                4.衍生化
                加入50μL MSTFA(含有3%的碘化*基甲硅烷基),充分混合,70℃條件下反應 20min,冷卻。
                5. Varian Saturn 2200 GC-MS檢測
                6. 樣品成分
                睪丸激素
                19-noretiocholanon
                16-A-hydroxyetiocholanone
                康復龍
                普拉睪酮
                10-去甲睪酮
                康復龍代謝物1
                康復龍代謝物2
                11-B-羥基睪丸激素
                去氫甲基睪丸素
                19-norandosterone
                16-A-表睪(甾)酮
                司坦唑醇
                方法中使用的SPE柱:
                Bond Elut Certify(130mg, 3mL,PN.12102051)。
                 
                北京東方惠普科技有限公司
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